NucView 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells

Descripción

NucView ™ 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells, nuevo sustrato de caspasa fluorogénico  permeable a la membrana  celular diseñado para la detección de la actividad de caspasa-3 en células vivas en tiempo real.

La tasa de apoptosis varía típicamente de célula a célula, incluso dentro de la misma población. Como resultado, diversos eventos apoptóticos o marcadores que acompañan el proceso de apoptosis también se producen de manera diferente entre las células. Por lo tanto, es importante ser capaz de detectar estos eventos apoptóticos sobre una base de células individuales. Tradicionalmente, la actividad de caspasa se ha detectado ya sea usando un sustrato enzimático fluorogénico impermeable a la membrana, como DEVD-R110, o un inhibidor de marcado fluorescentemente, como FLICA. En el primer caso, se requiere la lisis celular, impidiendo de este modo la detección de la actividad de caspasa en células vivas. Además, dichos ensayos de caspasa sólo miden la actividad media de la caspasa de una población celular muy heterogénea en un momento dado. En el último caso, aunque un reactivo FLICA puede entrar en las células vivas para detectar la actividad de la caspasa, sólo la señal fluorescente inicial después de la aplicación del reactivo realmente puede reflejar la actividad de la enzima o el estado de las células apoptóticas, ya que cualquier señal detectada después de la inicial » instantánea «tendrá que considerar la posible interferencia del inhibidor de la enzima y la propia célula apoptótica.

A diferencia de los ensayos de caspasa convencionales, NucView ™ 488 caspase-3 sustrate kit detecta la actividad de caspasa-3 en las células intactas individuales sin inhibir la actividad de la caspasa-3. El sustrato se compone de un colorante de ADN y el resto de un sustrato fluorogénico DEVD  específico para la caspasa-3. El sustrato, que es a la vez no fluorescente y no funcionales como un colorante de ADN, cruza rápidamente las membranas celulares para entrar en el citoplasma, donde se escinde por la caspasa-3 para formar un colorante de alta afinidad de ADN que tiñe el núcleo de color verde brillante. Por lo tanto, la NucView ™ 488 caspase-3 sustrate es bi-funcional, que permite la detección de la actividad intracelular de la caspasa-3 y la visualización de los cambios en la morfología nuclear durante la apoptosis. La tinción fluorescente producida en respuesta a la actividad de caspasa-3 es compatible con la posterior fijación y permeabilización de la inmunotinción.

El kit contiene NucView ™ 488 caspase-3 sustrate y un inhibidor de la caspasa-3 Ac-DEVD-CHO suficiente para 100 citometría de flujo o ensayos de microplaca (200 uL volumen de ensayo). El kit de tamaño de prueba contiene reactivos suficientes para 25 ensayos (200 uL volumen de ensayo). El número de ensayos de microscopía de fluorescencia que se pueden realizar con el kit puede variar en función del tamaño del recipiente de cultivo y el volumen de colorante utilizado. El kit proporciona una herramienta conveniente para el perfil de la población de las células apoptóticas en base a la actividad de caspasa-3 utilizando microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

Componentes del kit:

NucView ™ 488 de la caspase-3 sustrate, 0,2 mM en DMSO
Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2 mM en DMSO

Caracteristicas:

  • Detección en tiempo real de la caspase-3 en células intactas.
  • Bi-funcional: permite la visualización de la actividad de caspasa-3 y la morfología nuclear apoptótica al mismo tiempo.
  • Sencillo y rápido: ensayo de 15 minutos.
  • Versátil: Para la detección por citometría de flujo, microscopía de fluorescencia, o lector de microplacas de fluorescencia utilizando configuraciones de detección de fluoresceína.
  • Corregible: Compatible con los métodos de fijación y permeabilización estándar para la posterior tinción de inmunofluorescencia.

Productos relacionados para NucView ™:

NucView 488 Caspase-3 Enzyme Substrate, 1 mM in DMSO, Dual Apoptosis Assay with NucView 488 Caspase-3 Substrate and Sulforhodamine 10 (Texas Red) Annexin V, NucView 488 and MitoView 633 Apoptosis Assay Kit.

La tecnología del sustrato de la enzima NucView ™ está cubierto por la patente de EE.UU. Nos. 8.092.784 y 8.586.325.

Protocolo

Catalago

Líneas celulares y Referencias validados para sustrato de NucView ™ 488 caspasa-3

Catalago

 

 

Video

NucView Apoptosis v